方案概述

維生素C口含片屬維生素類藥，用于體內(nèi)需大量補(bǔ)充維生素C時(shí)。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS1-(X-092)-2004Z)中規(guī)定用滴定法(碘量法)測(cè)定維生素C的含量，該法操作繁瑣，影響因素較多，特別是專屬性較差。

本文通過試驗(yàn)，建立了HPLC法測(cè)定該制劑中維生素C的含量。采用高效液相色譜法，準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可作為維生素C口含片中維生素C含量測(cè)定的方法，以控制藥品質(zhì)量。

一、儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括泵、檢測(cè)器、色譜工作站；

維生素C對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100425-200301 ) ；

維生素C口含片(協(xié)和藥業(yè)有限公司，規(guī)格0.5g/片，每片含維生素C500mg，批號(hào)040301) ；

甲醇 (色譜純)；

其余試劑均為分析純。

二、實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件

色譜柱 : Inertsil ODS - 3， 4. 6×250mm ( GL SciencesInc)；

流動(dòng)相 :己烷磺酸鈉溶液 (取 0. 94g己烷磺酸鈉，置1 000mL量瓶中 ，加冰醋酸 10mL ，加水稀釋至刻度 ，搖勻 )

-甲醇 ( 6∶ ， pH = 3. 1；流速 : 0. 8mL /m in；柱溫 :室溫；檢測(cè)波長 : 245nm；進(jìn)樣量 10μL。理論板數(shù)按維生素 C峰計(jì)算不低于 3 000。

2.2　測(cè)定波長的選擇

取維生素 C對(duì)照品適量 ，加甲醇稀釋成 0. 05mg /mL的溶液 ，在 200～400nm波長掃描，結(jié)果在 245nm波長處有最大吸收。故以 245nm為檢測(cè)波長。

2.3對(duì)照品溶液的配制

精密稱取維生素 C對(duì)照品 0. 025 0g，置 50mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻 ，精密量取 10mL ，置 100mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻 ，即得對(duì)照品溶液。

2.4供試品溶液的配制

取維生素 C口含片 ，研細(xì) ，精密稱取適量 (約相當(dāng)于維生素 C 0. 025g) ，置 50mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻 ，精密量取 10mL ，置 100mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻 ，濾過 ，即得供試品溶液。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取維生素C對(duì)照品0.0250g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取適量，加甲醇稀釋成0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.0375mg/mL、0.05mg/mL、0.0625mg/mL、0.075mg/mL、0.0875mg/mL的對(duì)照品溶液。進(jìn)樣量為10μL。

以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，得回歸方程:Y=272850X+22636，r=0.9999。結(jié)果表明，

維生素C在0.125～0.875μg之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積值。結(jié)果峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.17% ，表明本法精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖。結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.24% ，說明供試品溶液在 3h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)

取維生素C口含片樣品6份，分別按供試品溶液制備的方法操作，按上述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算維生素C含量。結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.26%，表明本方法有良好的重現(xiàn)性。

2.9空白試驗(yàn)

按處方比例和工藝，制備不含維生素C的空白樣品，按樣品測(cè)定方法制備，得空白溶液。通過進(jìn)樣分析試驗(yàn)可知，維生素C口含片中其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。

2.10加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的維生素C口含片樣品6份，樣品量約為供試品溶液制備方法的一半量，精密加入維生素C對(duì)照品，分別按上述供試品溶液制備的方法操作 ，按上述擬定的色譜條件測(cè)定 ，記錄色譜圖，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明，x為99.65%，RSD為0.38%。

2.11樣品測(cè)定

按上述方法測(cè)定維生素C口含片的含量，并與WS1-(X-092)-2004Z的方法進(jìn)行比較，共測(cè)定5份。結(jié)果見下表：

 

2.12　維生素C的檢出限和定量限

經(jīng)對(duì)維生素C對(duì)照品溶液逐步進(jìn)行稀釋，進(jìn)樣，得測(cè)定維生素C的檢出限為1.5*10^-3μg（信噪比為3:1），定量限為5.0*10^-3μg（信噪比為10:1）。

三、結(jié)論

維生素C在空氣中極不穩(wěn)定，配制的溶液不宜久置，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)新鮮配制，以減少氧化。

利用HPLC法測(cè)定維生素C口含片中維生素C的含量，與滴定法相比，HPLC法更趨于靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為該制劑中維生素C的含量控制方法。

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